在生物醫藥領域,抗體作為一種重要的治療性藥物,其研發和生產技術一直備受關注。CHO細胞因具有較大優勢,成為生產抗體的重要平臺。本文將介紹CHO細胞培養抗體表達工藝,探抗體生產關鍵技術及注意事項。
一、CHO細胞培養抗體表達簡介
CHO細胞培養抗體表達工藝是指利用CHO細胞作為表達系統,在特定條件下培養,使細胞內抗體基因得以表達并分泌到培養基中。這一工藝主要包括細胞培養、誘導表達、收獲和純化等步驟。
二、抗體表達關鍵技術
1. 細胞培養
(1)選擇合適的培養基:CHO細胞培養初期采用含10%胎牛血清的DMEM/F12培養基,保證細胞生長所需營養。后期則選用無血清培養基(SFM),以避免血清污染和提高產品純度。
(2)培養條件:在37℃、5% CO2的條件下,確保細胞生長環境的穩定。
2. 誘導表達
(1)選擇合適的誘導劑:根據抗體基因的特性,選擇合適的誘導劑,如異丙乙酸、氯化鈷等,以提高抗體表達水平。
(2)誘導時機:在細胞生長至對數生長期時進行誘導,有利于抗體的高效表達。
3. 收獲和純化
(1)細胞收獲:根據細胞生長曲線,選擇合適的收獲時機,以提高抗體產量。
(2)純化:采用高效液相色譜、離子交換層析等方法對收獲的抗體進行純化,去除雜質,提高產品純度。
三、CHO細胞培養抗體表達過程注意事項
1. 細胞株的篩選與優化:選擇穩定、高產的CHO細胞株,通過基因工程等手段優化抗體基因,提高抗體表達水平。
2. 培養條件的優化:根據抗體基因的特性和細胞生長曲線,調整培養條件,如溫度、pH、氧氣濃度等,以提高抗體產量。
3. 誘導劑的選擇與優化:通過實驗篩選合適的誘導劑及濃度,以實現抗體的高效表達。
4. 避免污染:在培養過程中,嚴格控制無菌操作,防止外源性污染。同時,定期檢測培養基和設備,確保無菌狀態。
5. 監測細胞生長與代謝:通過細胞計數、生物傳感器等技術,實時監測細胞生長情況,及時調整培養條件,保證抗體生產的穩定性。
6. 優化純化工藝:根據抗體特性,選擇合適的純化方法,提高產品純度,降低生產成本。
CHO細胞培養抗體表達工藝是一種高效生產抗體的關鍵技術。通過優化細胞培養、誘導表達、收獲和純化等環節,可以實現抗體的高產、高純度生產。在實際操作過程中,需注意細胞株篩選、培養條件優化、誘導劑選擇、污染控制、細胞生長與代謝監測及純化工藝優化等方面,以提高抗體生產的效率和產品質量。
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