SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳原理：

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，是在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中引進SDS（十二烷基硫酸鈉）， SDS會與變性的多肽，并使蛋白帶負電荷，由于多肽結(jié)合SDS的量幾乎總是與多肽的分子量成正比而與其序列無關(guān)，因此SDS多肽復合物在丙稀酰胺凝膠電泳中的遷移率只與多肽的大小有關(guān)，在達到飽和的狀態(tài)下，每克多肽可與1.4g去污劑結(jié)合。

當分子量在15KD到200KD之間時，蛋白質(zhì)的遷移率和分子量的對數(shù)呈線性關(guān)系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW為分子量，X為遷移率，k、b均為常數(shù)，若將已知分子量的標準蛋白質(zhì)的遷移率對分子量對數(shù)作圖，可獲得一條標準曲線，未知蛋白質(zhì)在相同條件下進行電泳，根據(jù)它的電泳遷移率即可在標準曲線上求得分子量。

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳常用試劑及設備

試劑：蛋白值樣品，SDS-PAGE loading buffer，PBS，Tris-Hcl (PH 8.8)， Tris-Hcl (PH 6.8) ，30%丙烯酰胺，10%SDS，10%過硫酸，5×SDS-PAGE電泳緩沖液，考馬斯亮藍R-250染色液，脫色液、天能預制膠。

儀器耗材：垂直電泳槽，電泳儀，電泳儀電源，移液槍，移液槍tip吸頭，離心管、試劑瓶。

實驗步驟

一、凝膠配置

1．分離膠的配制

（1）找出配套的膠板，用擦鏡紙擦干凈，并固定在配膠器上。隨后用去離子水試漏；

（2）若膠板不漏水，就進行分離膠的配制。依次將水、30%丙烯酰胺、1.5M Tris-Hcl（PH 8.8）、10%SDS、10%過硫酸銨加到干凈的小燒杯中，混勻（1mm的膠板，一般配一塊膠用5ml。所配的膠濃度一般為12%，但濃度也要視情況而定。蛋白越小，膠的濃度越大）；

（3）將膠板中的水倒掉，并用濾紙吸干水分（不要將濾紙塞到膠板底部）；

（4）小燒杯中再加入TEMED，混勻。（TEMED可使膠凝固，所以最后加）；

（5）灌膠：混勻的分離膠沿著膠板邊緣輕輕灌下，防止產(chǎn)生氣泡；

（6）用水將分離膠壓平（用水灌滿，同時加水時要緩慢加入，防止把膠吹起）。

也可以直接使用預制膠，預制膠直接拆開即用，不用配制。

2．濃縮膠的配制

（1）待分離膠與水中間形成明顯的橫線，即分離膠凝固。隨后進行濃縮膠的配制，依次將水、30%丙烯酰胺、1.0M Tris-Hcl（PH 6.8）、10%SDS、10%過硫酸銨加到干凈的小燒杯中；

（2）將分離膠上層的水倒掉，并用濾紙吸干水分（盡量不要把濾紙插入）；

（3）小燒杯中再加入TEMED，混勻；

（4）灌膠。然后插入梳子；

（5）把制膠器倒過來，膠仍然不會往外流，或可以明顯看出梳子中兩個齒之間的膠面明顯凹下去，說明濃縮膠凝固。將凝固的膠板裝入電泳槽內(nèi)，并在電泳槽內(nèi)加入SDS-PAGE電泳緩沖液，把膠浸泡一段時間，時間越長越好（防止梳子與膠相連，或膠因濕度不夠而縮減）；

（6）點樣時，再把梳子拔出來，拔時動作要輕，防止膠齒被拔斷。

二、SDS-PAGE電泳步驟

1、調(diào)膠：拔掉SDS膠上的梳子，并用小針調(diào)整齒的位置（使它們都平行）。

2、點樣：用20µL的小槍頭，吸煮過的樣品10µL，對準膠孔點樣，注意不要把樣品點在外面。使用適當?shù)姆肿恿康鞍譵arker。

3、電泳：電泳儀正負極接好，打開電源。濃縮膠：電壓 low 100V，分離膠：電壓 high 150V。

4、卸膠：等膠內(nèi)的所有的藍色都跑出去，電泳停止，一般時間為1-2小時左右。把膠板從電泳儀上卸下，用刀片把膠板撬開，膠的濃縮膠部分割除；

5、染色：放入考馬斯亮藍R-250染色液中進行常溫過夜染色；

5、脫色：將過夜染色的SDS-PAGE膠放入脫色液中進行脫色，直到背景發(fā)白。

   蘇州阿爾法生物是一家集生命科學儀器設備、實驗耗材和實驗試劑供應于一身的專業(yè)公司。阿爾法生物產(chǎn)品覆蓋生命科學研究、生物制藥、環(huán)境監(jiān)測、食品安全等領(lǐng)域，包括的實驗室儀器設備有生物顯微鏡、細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、蛋白電泳系統(tǒng)、數(shù)字PCR儀、高通量分析儀、高速冷凍離心機、超速離心機、臺式高速離心機、低速離心機、落地式離心機、迷你離心機、真空濃縮儀、恒溫恒濕培養(yǎng)箱、生物反應器、細菌培養(yǎng)箱研磨儀等，實驗耗材常用的nest培養(yǎng)瓶、rainin移液槍tip頭、離心管、PCR管、8聯(lián)排管、三角搖瓶、培養(yǎng)皿等，實驗試劑包括天根試劑盒、質(zhì)粒抽提試劑盒、蛋白抗體、碧云天試劑、阿拉丁試劑、腫瘤細胞株、基因編輯細胞、支原體清除試劑盒等。阿爾法生物一直與國際生命科學儀器廠商以及一些新興科技公司保持著深度的合作關(guān)系，這也為產(chǎn)品供應和技術(shù)支持提供了有力保障。 作為十四年年專注于實驗室儀器設備、實驗耗材和實驗試劑供應商，無論是實驗室的常規(guī)使用，還是科研人員的前沿探索，阿爾法生物都能夠為您提供良好的軟硬件支持和快捷、周到的服務。