購買細胞收到細胞前,應做哪些準備工作?
購買細胞應具有一定細胞培養知識與經驗,并具備基本實驗設備,如細胞培養實驗室、超凈工作臺、CO2培養箱,倒置顯微鏡等;還應準備好相應的細胞無菌培養基、血清、雙抗、細胞培養瓶、培養板、移液管等。
購買的細胞收到細胞后,應該怎么操作?
1. 觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有,請及時與技術支持聯系;
2. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,將細胞置于細胞培養箱內靜置培養,隔天再取出進行觀察;
3. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等;
4. 可將培養瓶內多余的培養基轉移至50ml無菌離心管中,備用;細胞傳代時,可以將該培養基按照一定比例和自備的培養基混合使用,讓細胞逐漸適應培養條件;
5. 確認細胞狀態良好后,應及時將細胞凍存,再進行后續的實驗,避免后期實驗失誤可能發生細胞污染或死亡而導致的細胞丟失;
6. 建議收到細胞后前3天,100X、200X、400X各拍3-5張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和廠家技術支持溝通交流。
細胞發貨標準是什么?
細胞發貨時,保證細胞處于生長對數期;貼壁細胞達到75%以上匯合度,約5×10^5cells/T25細胞培養瓶;傳代次數5代以內;凍存細胞發2個凍存管;無微生物污染。
細胞一般是以什么形式運輸?
細胞通常用T25細胞培養瓶培養,發貨時用相應的培養基灌滿細胞瓶,密封瓶口后放在包裝盒內,以快遞的方式發送給客戶。天氣變冷,溫度低于4℃時,以凍存細胞,干冰運輸的方式發貨。
細胞培養過程中,是否可以更換培養基?
不建議替換。每株細胞均有其特定使用且已適應的培養基,而且經過一定時間馴化后,若驟然改變培養條件,細胞有可能出現不適應,表現出生長緩慢、顆粒增多、死細胞出現,造成細胞無法存活;也有些細胞在更換培養基后也能正常的生長,細胞狀態也能維持,但問題會出現在凍存后期的復蘇過程,有可能細胞沒法復蘇,所以不建議隨便更換培養基。
購買細胞后如何選擇細胞培養瓶?
一般,生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態,那么采用塑料瓶會比玻璃瓶的效果好;生長速度快的細胞,用玻璃瓶培養的效果會更好。因此,對于同一種細胞,在其生長速度慢的時候(比如細胞剛復蘇時或者原代培養),塑料瓶會好一點;而在其生長旺盛的時候,玻璃瓶則相對會好一點。
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