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細胞培養生物反應器放大效果不理想,可能因為你沒有注意到這幾點?

 更新時間:2022-09-22 點擊量:1535

隨著轉基因制藥技術的不斷發展,細胞培養放大的規模化需求也在逐漸增大,通常在實驗室進行的小批量細胞傳代實驗由于投入成本小,操作過程熟練,基本不會存在太大問題,當進入生物反應器規模化培養階段時,投入的成本往往較大,需要考慮的因素也變多,稍不注意就會影響到細胞的產量或質量。

其實細胞的培養放大不論是處在哪個階段的放大都需要保持在同一恒定的環境下進行,這樣才能培養出生長密度、細胞存活率、以及培養產物等維持相對穩定的狀態。所以在進入生物反應器擴培階段時,需要注意到以下幾點:

一、攪拌槳類型、攪拌轉速及剪切力

通常使用的攪拌式生物反應器,可以使細胞與營養物質充分混合、懸浮具有較高的通氣溶氧環境,但是攪拌槳類型以及過快的攪拌轉速帶來了較高的剪切力,由于細胞不同于微生物,構成細胞的細胞質較為脆弱,對剪切力比較敏感,通常情況下,細胞培養適宜的葉端速為 1-2m/s。所以選擇合適的攪拌槳類型及合適的轉速控制也是很有必要的。搏旅的Bio PRO系列微載體培養生物反應器在設計時采用提升式攪拌槳在保證混合效果的同時也有效降低了細胞剪切力,對于DISKS載體來說,這種攪拌槳的設計幾乎不會因剪切力和通氣氣泡對細胞造成任何不良影響。

攪拌速率計算公式如下:

 

 

 

葉端速計算公式如下

 

 

二、通氣量、溶氧度、PH/DO氧傳遞速率參數控制 

細胞放大培養過程中,溶氧度參數、CO2濃度、以及通氣量的大小等重要參數都會直接影響到細胞的生長狀態,比如隨著CO2濃度的增加,PH值也會相應增大從而影響到培養環境的改變不利于細胞生長;所以溶氧度及二氧化碳濃度的控制需要及時準確。搏旅生產的Bio PRO系列微載體培養生物反應器系列采用了熱質流控制儀全面實現了氣體流量的全自動控制;并且采用PID控制系統準確控制溶氧度、CO2濃度等,從而及時平衡PH參數,在通氣設計上深層通氣采用軟、硬件相結合的控制方式有效消除了培養基的逆流,并采用了獨立的滅菌系統,保證滅菌的*性。

三、滅菌操作的*性

我們知道在細胞生長過程中,微生物的危害是致命性的,滅菌的*性也成為影響細胞存活率的重要因素之一。在進行取樣檢驗,補充培養基等操作過程中很容易造成細菌污染。楚怡生物反應器設計了在位滅菌加樣/取樣閥組,有效避免了操作污染,在進氣與尾氣過濾器、物料進口、管底閥、管道等部件也都采用了獨立控制的滅菌系統,以達到整罐滅菌,360°滅菌的效果,保證了滅菌的*性。 

除了以上幾個方面,培養基的選擇、培養方式的選擇攪拌槳類型、電極、溫度、混合時間、細胞密度、操作方便性、生物反應器材質、氣體壓力調節等相關參數。由此可見,熟練掌握細胞生產擴培過程中的各項參數并做好記錄及數據分析是細胞規模擴培工藝的核心也是細胞的放大培養成功的關鍵步驟。

 

      蘇州阿爾法生物所提供的楚怡生物反應器常用于MDCK細胞、HEK293細胞培養,懸浮細胞培養、貼壁細胞培養、微載體培養、微生物培養、生物制藥等領域,不僅有適合實驗使用的中小型生物反應器,還可以根據不同用戶需求定制大型尺寸的生產型發酵罐、生物反應器。實現了廠商直供,一罐多用,同時我們還提供免費的安裝服務、免費技術支持、免費操作指導等服務。